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保存温度
2-8℃
注意事项
1.试剂瓶开盖后各组分按要求条件保存；2.拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
适用样本
动物脑组织/培养神经元
仪器准备
1. 高速冷冻离心机
2. 超速离心机
3. 振荡器
4. Dounce匀浆器
5. 涡旋混匀器
6. 移液器
7. 冰箱
8. 冰盒
2. 超速离心机
3. 振荡器
4. Dounce匀浆器
5. 涡旋混匀器
6. 移液器
7. 冰箱
8. 冰盒
试剂准备
PBS缓冲液
耗材准备
1. 离心管
2. 吸头
3. 一次性手套
4. 70 μm 细胞筛
2. 吸头
3. 一次性手套
4. 70 μm 细胞筛
使用注意事项
1. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3. 以下步骤以大鼠大脑皮层为例，每样约 200 mg 组织。实际使用时可以等比例调整。
2. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3. 以下步骤以大鼠大脑皮层为例，每样约 200 mg 组织。实际使用时可以等比例调整。
使用方法
电子版仅供参考，最终以试剂盒里的纸质说明书为准！
1. 大鼠/小鼠颈椎脱臼处死，快速取200 mg新鲜大鼠大脑皮层组织（或海马），用预冷的PBS洗涤干净，去除血迹和结缔组织。
2. 用手术剪刀或刀片尽可能剪碎，用冷PBS洗涤两次。
3. 沉淀中加入1 ml冷的提取液试剂 A混匀，置冰上5分钟。转移至预冷的玻璃匀浆器中。
4. 用Dounce匀浆器匀浆。
5. 匀浆液经70 μm 细胞筛过滤。
6. 收集匀浆液，在4℃，900×g条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
7. 将上清在4℃，12,000-15,000×g力条件下离心20分钟。弃上清，收集沉淀。
8. 在沉淀中加入500 μl冷的提取液试剂C，轻轻混匀。在4℃，12,000-15,000×g条件下离心20分钟。弃上清，留沉淀。
9. 在沉淀中加入500 μl冷的提取液试剂B和2 μl蛋白酶抑制剂D，轻轻混匀。在4℃条件下振荡40-60分钟。
10. 在4℃，20,000×g力条件下离心20-30分钟。弃沉淀，留上清。
11. 在上清中加入1 ml冷的提取液试剂C，轻轻混匀。
12. 在4℃，200,000×g力条件下离心60分钟。弃上清，留沉淀。
13. 沉淀即为突触前膜。
1. 大鼠/小鼠颈椎脱臼处死，快速取200 mg新鲜大鼠大脑皮层组织（或海马），用预冷的PBS洗涤干净，去除血迹和结缔组织。
2. 用手术剪刀或刀片尽可能剪碎，用冷PBS洗涤两次。
3. 沉淀中加入1 ml冷的提取液试剂 A混匀，置冰上5分钟。转移至预冷的玻璃匀浆器中。
4. 用Dounce匀浆器匀浆。
5. 匀浆液经70 μm 细胞筛过滤。
6. 收集匀浆液，在4℃，900×g条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
7. 将上清在4℃，12,000-15,000×g力条件下离心20分钟。弃上清，收集沉淀。
8. 在沉淀中加入500 μl冷的提取液试剂C，轻轻混匀。在4℃，12,000-15,000×g条件下离心20分钟。弃上清，留沉淀。
9. 在沉淀中加入500 μl冷的提取液试剂B和2 μl蛋白酶抑制剂D，轻轻混匀。在4℃条件下振荡40-60分钟。
10. 在4℃，20,000×g力条件下离心20-30分钟。弃沉淀，留上清。
11. 在上清中加入1 ml冷的提取液试剂C，轻轻混匀。
12. 在4℃，200,000×g力条件下离心60分钟。弃上清，留沉淀。
13. 沉淀即为突触前膜。
常见问题分析
突触前膜如何鉴定？
Western blot 检测标志物，突触前膜Marker：
Synaptophysin (SYP, 38 kDa)
Synapsin I (74 kDa)
SNAP-25 (25 kDa)
VAMP2 (18 kDa)
Bassoon (420 kDa)。
Western blot 检测标志物，突触前膜Marker：
Synaptophysin (SYP, 38 kDa)
Synapsin I (74 kDa)
SNAP-25 (25 kDa)
VAMP2 (18 kDa)
Bassoon (420 kDa)。
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