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保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1.染料短期2周内可以2-8℃保存。染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
2.染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4.试剂拆封后请尽快使用完。
2.染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4.试剂拆封后请尽快使用完。
有效期
6个月
检测方法
1.流式细胞仪 .荧光显微镜 3.激光共聚焦
适用样本
1.悬浮细胞 2.贴壁细胞
产品应用
流式细胞仪/荧光显微镜/激光共聚焦
仪器准备
1.激光共聚焦/荧光显微镜//光度计/流式细胞仪
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.HBSS
2.HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2.染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
3..使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
4.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
5.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
6.染色后立即进行分析。
7.本染色液可用于细胞涂片、细胞的检测。
8.可以在染色溶液中加入等体积的20% Pluronic F127溶液，Pluronic F127 可以帮助F04探针更快进入细胞，不建议在Pluronic F127中长期保存F04探针。9.由于探针在水中的稳定性比较差，染色工作液必须现配现用，并且在当天用完。
10.探针对湿度比较敏感，每次取完需要量后，必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量，分装密封保存。不可使用含水的吸头。
11.试剂A母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。
2.染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
3..使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
4.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
5.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
6.染色后立即进行分析。
7.本染色液可用于细胞涂片、细胞的检测。
8.可以在染色溶液中加入等体积的20% Pluronic F127溶液，Pluronic F127 可以帮助F04探针更快进入细胞，不建议在Pluronic F127中长期保存F04探针。9.由于探针在水中的稳定性比较差，染色工作液必须现配现用，并且在当天用完。
10.探针对湿度比较敏感，每次取完需要量后，必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量，分装密封保存。不可使用含水的吸头。
11.试剂A母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。
使用方法
1． 染色工作液的配制：
根据样本数量，用37℃培养箱预热的HBSS将荧光染料200-1000倍稀释，配制成染色工作液。
2． 细胞染色
悬浮细胞染色
1) 用PBS洗涤细胞2次。
2) 加入适量体积的染色工作液重悬细胞，使其密度大约为1×106/mL。
3) 在37 ℃孵育细胞 20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
4) 加入 5 倍体积的含有1%胎牛血清的 HBSS，再继续孵育40分钟。
5) 孵育结束，500×g离心5分钟。
6) 弃上清液，再次缓慢加入37℃预热的HBSS重悬细胞。
7) 重复（5），（6）步骤两次。
8) 加入HBSS重悬细胞，在37℃下再继续孵育30分钟。
9) 然后用该细胞进行荧光钙离子检测。
贴壁细胞染色
1) 用PBS洗涤细胞2次。
2) 细胞培养板中或细胞爬片上加入适量体积的染色工作液。
3) 37 ℃孵育细胞 20-60分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
4) 吸干染色工作液，用HBSS洗培养板或盖玻片2～3次，每次用预热的HBSS覆盖所有细胞，然后吸干培养基。
) 加入HBSS，在37℃下再继续孵育30分钟。
6) 然后用该细胞进行荧光钙离子检测。
3． 用荧光显微镜或流式细胞仪检测
激发波长为550nm，最大发射波长为581nm。
根据样本数量，用37℃培养箱预热的HBSS将荧光染料200-1000倍稀释，配制成染色工作液。
2． 细胞染色
悬浮细胞染色
1) 用PBS洗涤细胞2次。
2) 加入适量体积的染色工作液重悬细胞，使其密度大约为1×106/mL。
3) 在37 ℃孵育细胞 20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
4) 加入 5 倍体积的含有1%胎牛血清的 HBSS，再继续孵育40分钟。
5) 孵育结束，500×g离心5分钟。
6) 弃上清液，再次缓慢加入37℃预热的HBSS重悬细胞。
7) 重复（5），（6）步骤两次。
8) 加入HBSS重悬细胞，在37℃下再继续孵育30分钟。
9) 然后用该细胞进行荧光钙离子检测。
贴壁细胞染色
1) 用PBS洗涤细胞2次。
2) 细胞培养板中或细胞爬片上加入适量体积的染色工作液。
3) 37 ℃孵育细胞 20-60分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
4) 吸干染色工作液，用HBSS洗培养板或盖玻片2～3次，每次用预热的HBSS覆盖所有细胞，然后吸干培养基。
) 加入HBSS，在37℃下再继续孵育30分钟。
6) 然后用该细胞进行荧光钙离子检测。
3． 用荧光显微镜或流式细胞仪检测
激发波长为550nm，最大发射波长为581nm。
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