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产品概述
product description
贝博® BBoxiProbe® 羟基自由基（•OH）检测试剂盒是一种利用羟基自由基（•OH）特异性深红色荧光探针BBoxiProbe® O282进行羟基自由基检测的试剂盒。BBoxiProbe® O282可自由透过活细胞膜进入细胞内，并被细胞内的羟基自由基（•OH）氧化，产生红色荧光产物。根据活细胞中红色荧光的产生，可以判断细胞羟基自由基（•OH）含量的多少和变化。用流式细胞仪或荧光显微镜可直接观察，是一种快速简便的组织或培养活细胞中羟基自由基（•OH）检测方法。
保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1.试剂瓶开盖后各组份按要求条件保存。
2.拆封后请尽快使用完！
2.拆封后请尽快使用完！
有效期
6个月
检测方法
激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪
适用样本
悬浮细胞 / 贴壁细胞
仪器准备
1.激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪，
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
PBS缓冲液或者HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.荧光检测专用黑色96孔板
2.吸头
3.一次性手套
4.荧光检测专用黑色96孔板
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2.荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
3.探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标记情况是否正常。
4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。
5.BBoxiProbe® O282探针在光照和空气中易被氧化，注意避光密封保存。
6.对不同的细胞，应选择合适的孵育时间，以观察羟自由基的变化。
2.荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
3.探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标记情况是否正常。
4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。
5.BBoxiProbe® O282探针在光照和空气中易被氧化，注意避光密封保存。
6.对不同的细胞，应选择合适的孵育时间，以观察羟自由基的变化。
使用方法
BBoxiProbe® O282探针标记：
1. BBoxiProbe® O282溶液可在新鲜无血清培养基、HBSS缓冲液、PBS缓冲盐溶液稀释到所需浓度，200倍稀释，以此染色工作液更换细胞培养基；也可直接向细胞孵育液体中加入BBoxiProbe® O282探针溶液至所需浓度。
2. 依据细胞羟自由基含量的不同，孵育时间可选择15-90 分钟，在37℃或室温进行避光孵育。
3. 孵育结束后，用新鲜溶液清洗细胞。
4. 用相关仪器进行荧光检测。
荧光显微镜检测：
1. 对贴壁生长细胞或活组织，可直接在荧光显微镜下染色观察；
2. 对悬浮生长细胞，染色后取25-50μl细胞悬液滴到一张显微载玻片上，再盖上一张盖玻片。
3. 荧光显微镜检测。
流式细胞仪分析：
1. 对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。用0.5~1 ml冰冷PBS重悬细胞（5~10万）。
2. 采用560nm波长激发，测定575nm的发射，羟自由基强度高的细胞有较强的橙红色荧光。
1. BBoxiProbe® O282溶液可在新鲜无血清培养基、HBSS缓冲液、PBS缓冲盐溶液稀释到所需浓度，200倍稀释，以此染色工作液更换细胞培养基；也可直接向细胞孵育液体中加入BBoxiProbe® O282探针溶液至所需浓度。
2. 依据细胞羟自由基含量的不同，孵育时间可选择15-90 分钟，在37℃或室温进行避光孵育。
3. 孵育结束后，用新鲜溶液清洗细胞。
4. 用相关仪器进行荧光检测。
荧光显微镜检测：
1. 对贴壁生长细胞或活组织，可直接在荧光显微镜下染色观察；
2. 对悬浮生长细胞，染色后取25-50μl细胞悬液滴到一张显微载玻片上，再盖上一张盖玻片。
3. 荧光显微镜检测。
流式细胞仪分析：
1. 对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。用0.5~1 ml冰冷PBS重悬细胞（5~10万）。
2. 采用560nm波长激发，测定575nm的发射，羟自由基强度高的细胞有较强的橙红色荧光。
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