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产品概述
product description
贝博BBcellProbe®SIRT5活性检测试剂盒（SIRT5 Activity AssayKit)是采用荧光共振
能量转移（FRET）机制检测SIRT5活性的试剂盒。
贝博设计合成的BBcellProbeSIRT5特异性荧光底物连接荧光团和淬灭剂，在完整
的底物中，底物一端的荧光基团（fluorophore）的荧光被另一端的荧光受体淬灭基团
（quencher）淬灭，通过FRET效应抑制荧光。当FRET荧光底物被活性SIRT5在特异性位
点切开后，使荧光基团与淬灭基团分离，荧光基团被释放，荧光信号恢复
保存温度
2-8℃避光
注意事项
1.试剂瓶开盖后各组份按要求条件保存。
2.拆封后请尽快使用完！
2.拆封后请尽快使用完！
有效期
6个月
适用样本
1.纯化的重组酶 2.细胞裂解液 3.组织匀浆液
仪器准备
1.荧光酶标仪或荧光光度计
2.离心机
3.恒温水浴/气浴
4.移液器
5.冰箱
2.离心机
3.恒温水浴/气浴
4.移液器
5.冰箱
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.荧光检测专用的黑色96孔板
2.吸头
3.一次性手套
4.荧光检测专用的黑色96孔板
使用注意事项
1.预实验很重要。必须要做预实验，在正式实验之前取少量样本优化实验条件，并像正式样本一样认真进行，看实验结果是否可行，实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性，不同样本的实验条件通常差异较大，同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同，为了避免浪费正式样本和试剂，一定要提前预实验优化实验条件。
2.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
使用方法
电子版说明书仅供参考，最终以试剂盒的纸质说明书为准！
样品处理
1．根据模型需要培养细胞，药物处理。
2.用冷PBS洗涤细胞2-3次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3.吸掉PBS，按下面步骤检测SIRT5活性。
液体样本：直接测定。
细胞样本：
细胞样品：
1.收集5×10（6次方）个以上的细胞，在4C，500×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸千，收集细胞。
2.用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3.在细胞中加入50μ冷的裂解缓冲液E，高速涡旋振荡15秒。
4.置冰上持续振荡20-45分钟。
5.在4°C，12,000×g条件下离心15分钟。
6.将上清吸入另一预冷的干净离心管，用BCA法测定蛋白浓度。
7.置于冰上立即检测或者-80℃冰箱保存备用。
组织样品：
1.取适量组织样本剪碎，预冷的PBS冲洗去除残留血液，无菌滤纸吸干表面液体，快速称重后剪碎。
2.按照每50mg/100μl冷的裂解缓冲液E，用组织匀浆器/匀浆机匀浆至无明显肉眼可见组织块。
3.冰上振荡20-45分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
4.在4°℃，12,000×g条件下离心5分钟。
5.将中层上清液吸入另一预冷的干净离心管。
6.用BCA法测定蛋白浓度。
7.置于冰上立即检测或-80°C冰箱保存备用。
蛋白定量
活性检测
按表里加样测定。
样品处理
1．根据模型需要培养细胞，药物处理。
2.用冷PBS洗涤细胞2-3次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3.吸掉PBS，按下面步骤检测SIRT5活性。
液体样本：直接测定。
细胞样本：
细胞样品：
1.收集5×10（6次方）个以上的细胞，在4C，500×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸千，收集细胞。
2.用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3.在细胞中加入50μ冷的裂解缓冲液E，高速涡旋振荡15秒。
4.置冰上持续振荡20-45分钟。
5.在4°C，12,000×g条件下离心15分钟。
6.将上清吸入另一预冷的干净离心管，用BCA法测定蛋白浓度。
7.置于冰上立即检测或者-80℃冰箱保存备用。
组织样品：
1.取适量组织样本剪碎，预冷的PBS冲洗去除残留血液，无菌滤纸吸干表面液体，快速称重后剪碎。
2.按照每50mg/100μl冷的裂解缓冲液E，用组织匀浆器/匀浆机匀浆至无明显肉眼可见组织块。
3.冰上振荡20-45分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
4.在4°℃，12,000×g条件下离心5分钟。
5.将中层上清液吸入另一预冷的干净离心管。
6.用BCA法测定蛋白浓度。
7.置于冰上立即检测或-80°C冰箱保存备用。
蛋白定量
活性检测
按表里加样测定。
常见问题分析
荧光强度值偏低：
1.样本上样量不够；
2.样本不新鲜；
3.样本裂解不充分等；
1.样本上样量不够；
2.样本不新鲜；
3.样本裂解不充分等；
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